检验科改造施工_亚洲三区四区_DSA手术室净化_亚洲三区视频_导管室装修_亚洲三级在线播放_成都特殊科室建设厂家_医疗净化工程公司_四川华锐

攀枝花專業團隊談PCR擴增實驗室建設方案與規劃設計

網站編輯 2021-11-23 06:43:21 閱讀


PCR實驗室又叫基因擴增實驗室。PCR是聚合酶(Enzyme)鏈式反應(PolymeraseChainReaction)的簡稱。是一種分子生物學技術,用于放大特定的DNA片段,可看作生物體外的特殊DNA復制。通過DNA基因追蹤系統,能迅速掌握患者體內的病毒含量,其精確度高達納米級別,精確檢測乙肝病毒在患者體內存在的數量、是否復制、是否傳染、傳染性有多強、是否必要服藥、肝功能有否異常改變能及時判斷病人最適合使用哪類抗病毒藥物、判斷藥物療效如何、給臨床治療提供了可靠的檢驗依據。
開展PCR實驗室應具備的條件
1、必須擁有標準的的PCR熒光實驗(experiment)室;
由于該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規PCR相比,它有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前已得到了廣泛應用。
2、檢測設備必須符合標準PCR熒光實驗(experiment)室設置要求;
熒光定量PCR儀+實時熒光定量試劑+通用電腦+自動分析(Analyse)軟件,構成PCR-DNA/RNA實時熒光定量檢測系統。
3、必須通過國家臨床檢驗中心的驗收和認證;
4、檢測人員必須通過國家臨檢中心業務培訓并取得合格證書;
PCR實驗室內工作人員必須參加由國家衛生部或各省臨床檢驗中心舉辦的臨床基因擴增培訓班,并持證上崗。PCR實驗室通過驗收,實驗室至少必須應有兩個以上持有“臨床基因檢測上崗證”。PCR實驗室必須建立嚴格的實驗室管理制度、建立標準化操作程序(procedure)(SOP)、建立系列質量管理文件等,確保實驗室日常運行符合國家衛生部的要求,確保檢測結果準確、確保實驗室衛生安全,確保實驗室長期穩定(解釋:穩固安定;沒有變動)運行
5、必須在無菌(意思:沒有活菌)無塵環境下進行操作
下面介紹如何建立PCR實驗室
1、建立樣品準備區
這個區域專門用作樣品的準備,在制備和操作用于核酸提取的試劑時應該采取預防措施(指針對問題的解決辦法):
PCR產物和帶有要擴增序列的DNA克隆不能在這個房間操作。
組織培養物、組織標本和血清樣品都帶進樣品準備間處理,以根據應用的需要提取DNA或RNA。
用于樣品處理的工具不能被用作普通分子克隆的工具,也不能用作操作靶序列。
DNA樣品應該用有專門的防護或正壓活塞式移液管操作,以防止在吸取樣品時有氣溶膠遺留。
大體積樣品應該用單獨包裝的無菌(意思:沒有活菌)一次性移液管吸取。
管子打開前都要簡短離心以減少氣溶膠的產生,而且管子不能用力崩開,這樣會產生氣溶膠。
任何時候都應該穿實驗(experiment)服和帶手套,手套要經常更換,尤其在抽提過程中每一步之間都要更換。實驗服要專門用于樣品準備間,經常清洗。
2、樣品準備和RNA-PCRRNA-PCR的額外(extra)步驟(procedure)需要額外的樣品操作,這樣增加了樣品之間污染的機會。化學實驗室提供化學實驗條件及其進行科學探究的重要場所。其內有大量的儀器:鐵架臺、石棉網、酒精燈等實驗工具。通常會配有化學藥品柜,藥柜里面有常用的化學藥品,比如:五水硫酸銅(CuSO4·5H2O,即膽礬),氫氧化鈉溶液,石灰石,鹽酸等。為了避免這一問題,反轉錄一步可以在樣品準備區進行。在RNA-PCR中應用UNG以防止污染的方法也有報道。
3、建立前PCR區。生物實驗P2室主要用于初級衛生服務、診斷和研究,其實驗對象的危害等級為Ⅱ級(中等個體危害,有限群體危害),具體定義為“能引起人類 或動物發病,但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環境不會引起嚴重危害的病源體。實驗室感染不導致嚴重疾病,具備有效治療和 預防措施,并且傳播風險有限”。
該去專門用于準備各種反應,這個區域必須保持干凈,而且沒有來自克隆和樣品準備的污染。化學實驗室提供化學實驗條件及其進行科學探究的重要場所。其內有大量的儀器:鐵架臺、石棉網、酒精燈等實驗工具。通常會配有化學藥品柜,藥柜里面有常用的化學藥品,比如:五水硫酸銅(CuSO4·5H2O,即膽礬),氫氧化鈉溶液,石灰石,鹽酸等。前PCR區必須要有試劑和準備,特別是專門用于前PCR區的正壓活塞(piston)式移液管。
4、PCR實驗室試劑的操作。
所用的所有溶液都應該沒有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。
所有PCR試劑中使用的水都應該是高質量的-新鮮蒸餾(still)的去離子水,用0.22μm過濾的,并且是高壓滅菌(fungus)。
在20到25貯存的試劑建議加點像疊氮鈉一類的抗微生物劑,在擴增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴增反應。
所用試劑都應該以大體積配制,實驗一下看試劑是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量進行貯存。
所有試劑和樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。
新配制的試劑在用于準備新的標本之前應該加以檢驗。
樣品準備和前PCR區所使用的移液管在不使用時都應該小心保存。
5、在前PCR區建立PCR混合物。
可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分裝并保存在-20或4,在實驗(experiment)室只涉及到擴增一種或少數幾種特異序列時這樣做很有用。
如果你的實驗室使用多套引物,以致于配制包括所有試劑的單一反應混合物不夠經濟,可以考慮(consider)分裝保存夠一天的PCR成分。
作為一個規則,應該保存一套陰性、弱陽性和強陽性對照樣品來分析樣品配制和PCR前過程的效率和潔凈程度。而且,你也希望通過使用一個已知的弱陽性樣品來驗證(Experimental)你的樣品緩沖液以證明里面不含擴增抑制物。
陰性樣品要與每組樣品同時做,以分析是否存在樣品與樣品之間的污染以及是否存在PCR產物的污染,陰性對照應該包括核酸以外的所有試劑。
當做陽性對照時,有兩個理由決定了應該使用最少數量的核酸。
由于必須有對照反應,對照模板的特點應該予以考慮。
6、控制(control)污染的方法。
已設計出很有力的酶學方法用來消除一種形式的污染—使用UNG,這一技術能有效地消除由PCR產物引起的污染。另一種控制污染的方法是使用紫外線(Ultraviolet rays),這種方法不能完全消除污染問題,但可以將污染降低幾個數量級。
7、后PCR區PCR完成以后,需要分析樣品并解釋數據,應該留出一個專門用于反應后處理樣品的地方。后PCR活動中使用的所用試劑、一次性耗材和儀器都必須是專門用于這一目的,決不能把實驗室這一區域的試劑或儀器用于任何前PCR活動。

    x
    手機
    電話
    微信
    QQ
    主站蜘蛛池模板: 洁净棚-洁净工作棚-无菌室-净化工程公司_北京卫护科技有限公司 | 数显恒温油浴-电砂浴-高温油浴振荡器-常州迈科诺仪器有限公司 | 螺旋丝杆升降机-SWL蜗轮-滚珠丝杆升降机厂家-山东明泰传动机械有限公司 | 磁力去毛刺机_去毛刺磁力抛光机_磁力光饰机_磁力滚抛机_精密金属零件去毛刺机厂家-冠古科技 | 有声小说,听书,听小说资源库-听世界网 | 排烟防火阀-消防排烟风机-正压送风口-厂家-价格-哪家好-德州鑫港旺通风设备有限公司 | 宁夏档案密集柜,智能密集柜,电动手摇密集柜-盛隆柜业宁夏档案密集柜厂家 | 工业rfid读写器_RFID工业读写器_工业rfid设备厂商-ANDEAWELL | 浙江红酒库-冰雕库-气调库-茶叶库安装-医药疫苗冷库-食品物流恒温恒湿车间-杭州领顺实业有限公司 | 塑料薄膜_PP薄膜_聚乙烯薄膜-常州市鑫美新材料包装厂 | 空气净化器租赁,空气净化器出租,全国直租_奥司汀净化器租赁 | 快速门厂家-快速卷帘门-工业快速门-硬质快速门-西朗门业 | 盘煤仪,盘料仪,盘点仪,堆料测量仪,便携式激光盘煤仪-中科航宇(北京)自动化工程技术有限公司 | lcd条形屏-液晶长条屏-户外广告屏-条形智能显示屏-深圳市条形智能电子有限公司 | 安全光栅|射频导纳物位开关|音叉料位计|雷达液位计|两级跑偏开关|双向拉绳开关-山东卓信机械有限公司 | 手持式3d激光扫描仪-便携式三维立体扫描仪-北京福禄克斯 | 干培两用箱-细菌恒温培养箱-菲斯福仪器| WTB5光栅尺-JIE WILL磁栅尺-B60数显表-常州中崴机电科技有限公司 | 合肥钣金加工-安徽激光切割加工-机箱机柜加工厂家-合肥通快 | 净化车间装修_合肥厂房无尘室设计_合肥工厂洁净工程装修公司-安徽盛世和居装饰 | 中国产业发展研究网 - 提供行业研究报告 可行性研究报告 投资咨询 市场调研服务 | 昆山PCB加工_SMT贴片_PCB抄板_线路板焊接加工-昆山腾宸电子科技有限公司 | 上海道勤塑化有限公司 | 洗地机-全自动/手推式洗地机-扫地车厂家_扬子清洁设备 | 耐磨陶瓷管道_除渣器厂家-淄博浩瀚陶瓷科技有限公司 | 不干胶标签-不干胶贴纸-不干胶标签定制-不干胶标签印刷厂-弗雷曼纸业(苏州)有限公司 | 山东PE给水管厂家,山东双壁波纹管,山东钢带增强波纹管,山东PE穿线管,山东PE农田灌溉管,山东MPP电力保护套管-山东德诺塑业有限公司 | 楼梯定制_楼梯设计施工厂家_楼梯扶手安装制作-北京凌步楼梯 | 聚合氯化铝_喷雾聚氯化铝_聚合氯化铝铁厂家_郑州亿升化工有限公司 | 制冷采购电子商务平台——制冷大市场 | 电镀标牌_电铸标牌_金属标贴_不锈钢标牌厂家_深圳市宝利丰精密科技有限公司 | 昆明网络公司|云南网络公司|昆明网站建设公司|昆明网页设计|云南网站制作|新媒体运营公司|APP开发|小程序研发|尽在昆明奥远科技有限公司 | 液氮罐_液氮容器_自增压液氮罐-北京君方科仪科技发展有限公司 | 单电机制砂机,BHS制砂机,制沙机设备,制砂机价格-正升制砂机厂家 单级/双级旋片式真空泵厂家,2xz旋片真空泵-浙江台州求精真空泵有限公司 | 江苏皓越真空设备有限公司 | 科威信洗净科技,碳氢清洗机,超声波清洗机,真空碳氢清洗机 | EFM 022静电场测试仪-套帽式风量计-静电平板监测器-上海民仪电子有限公司 | 热镀锌槽钢|角钢|工字钢|圆钢|H型钢|扁钢|花纹板-天津千百顺钢铁贸易有限公司 | 济南网站建设|济南建网站|济南网站建设公司【济南腾飞网络】【荐】 | 假肢-假肢价格-假肢厂家-河南假肢-郑州市力康假肢矫形器有限公司 | 软文推广发布平台_新闻稿件自助发布_媒体邀约-澜媒宝 |