检验科改造施工_亚洲三区四区_DSA手术室净化_亚洲三区视频_导管室装修_亚洲三级在线播放_成都特殊科室建设厂家_医疗净化工程公司_四川华锐

內江專業團隊談PCR擴增實驗室建設方案與規劃設計

admin 2020-05-15 14:30:42 閱讀


PCR實驗室又叫基因擴增實驗室。PCR是聚合酶(Enzyme)鏈式反應(PolymeraseChainReaction)的簡稱。是一種分子生物學技術,用于放大特定的DNA片段,可看作生物體外的特殊DNA復制。通過DNA基因追蹤系統,能迅速掌握患者體內的病毒含量,其精確度高達納米級別,精確檢測乙肝病毒在患者體內存在的數量、是否復制、是否傳染、傳染性有多強、是否必要服藥、肝功能有否異常改變能及時判斷病人最適合使用哪類抗病毒藥物、判斷藥物療效如何、給臨床治療提供了可靠的檢驗依據。
開展PCR實驗室應具備的條件
1、必須擁有標準的的PCR熒光實驗(experiment)室;
由于該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍,而且與常規PCR相比,它有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點,目前已得到了廣泛應用。
2、檢測設備必須符合標準PCR熒光實驗(experiment)室設置要求;
熒光定量PCR儀+實時熒光定量試劑+通用電腦+自動分析(Analyse)軟件,構成PCR-DNA/RNA實時熒光定量檢測系統。
3、必須通過國家臨床檢驗中心的驗收和認證;
4、檢測人員必須通過國家臨檢中心業務培訓并取得合格證書;
PCR實驗室內工作人員必須參加由國家衛生部或各省臨床檢驗中心舉辦的臨床基因擴增培訓班,并持證上崗。PCR實驗室通過驗收,實驗室至少必須應有兩個以上持有“臨床基因檢測上崗證”。PCR實驗室必須建立嚴格的實驗室管理制度、建立標準化操作程序(procedure)(SOP)、建立系列質量管理文件等,確保實驗室日常運行符合國家衛生部的要求,確保檢測結果準確、確保實驗室衛生安全,確保實驗室長期穩定(解釋:穩固安定;沒有變動)運行
5、必須在無菌(意思:沒有活菌)無塵環境下進行操作
下面介紹如何建立PCR實驗室
1、建立樣品準備區
這個區域專門用作樣品的準備,在制備和操作用于核酸提取的試劑時應該采取預防措施(指針對問題的解決辦法):
PCR產物和帶有要擴增序列的DNA克隆不能在這個房間操作。
組織培養物、組織標本和血清樣品都帶進樣品準備間處理,以根據應用的需要提取DNA或RNA。
用于樣品處理的工具不能被用作普通分子克隆的工具,也不能用作操作靶序列。
DNA樣品應該用有專門的防護或正壓活塞式移液管操作,以防止在吸取樣品時有氣溶膠遺留。
大體積樣品應該用單獨包裝的無菌(意思:沒有活菌)一次性移液管吸取。
管子打開前都要簡短離心以減少氣溶膠的產生,而且管子不能用力崩開,這樣會產生氣溶膠。
任何時候都應該穿實驗(experiment)服和帶手套,手套要經常更換,尤其在抽提過程中每一步之間都要更換。實驗服要專門用于樣品準備間,經常清洗。
2、樣品準備和RNA-PCRRNA-PCR的額外(extra)步驟(procedure)需要額外的樣品操作,這樣增加了樣品之間污染的機會。化學實驗室提供化學實驗條件及其進行科學探究的重要場所。其內有大量的儀器:鐵架臺、石棉網、酒精燈等實驗工具。通常會配有化學藥品柜,藥柜里面有常用的化學藥品,比如:五水硫酸銅(CuSO4·5H2O,即膽礬),氫氧化鈉溶液,石灰石,鹽酸等。為了避免這一問題,反轉錄一步可以在樣品準備區進行。在RNA-PCR中應用UNG以防止污染的方法也有報道。
3、建立前PCR區。生物實驗P2室主要用于初級衛生服務、診斷和研究,其實驗對象的危害等級為Ⅱ級(中等個體危害,有限群體危害),具體定義為“能引起人類 或動物發病,但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環境不會引起嚴重危害的病源體。實驗室感染不導致嚴重疾病,具備有效治療和 預防措施,并且傳播風險有限”。
該去專門用于準備各種反應,這個區域必須保持干凈,而且沒有來自克隆和樣品準備的污染。化學實驗室提供化學實驗條件及其進行科學探究的重要場所。其內有大量的儀器:鐵架臺、石棉網、酒精燈等實驗工具。通常會配有化學藥品柜,藥柜里面有常用的化學藥品,比如:五水硫酸銅(CuSO4·5H2O,即膽礬),氫氧化鈉溶液,石灰石,鹽酸等。前PCR區必須要有試劑和準備,特別是專門用于前PCR區的正壓活塞(piston)式移液管。
4、PCR實驗室試劑的操作。
所用的所有溶液都應該沒有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。
所有PCR試劑中使用的水都應該是高質量的-新鮮蒸餾(still)的去離子水,用0.22μm過濾的,并且是高壓滅菌(fungus)。
在20到25貯存的試劑建議加點像疊氮鈉一類的抗微生物劑,在擴增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴增反應。
所用試劑都應該以大體積配制,實驗一下看試劑是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量進行貯存。
所有試劑和樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。
新配制的試劑在用于準備新的標本之前應該加以檢驗。
樣品準備和前PCR區所使用的移液管在不使用時都應該小心保存。
5、在前PCR區建立PCR混合物。
可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分裝并保存在-20或4,在實驗(experiment)室只涉及到擴增一種或少數幾種特異序列時這樣做很有用。
如果你的實驗室使用多套引物,以致于配制包括所有試劑的單一反應混合物不夠經濟,可以考慮(consider)分裝保存夠一天的PCR成分。
作為一個規則,應該保存一套陰性、弱陽性和強陽性對照樣品來分析樣品配制和PCR前過程的效率和潔凈程度。而且,你也希望通過使用一個已知的弱陽性樣品來驗證(Experimental)你的樣品緩沖液以證明里面不含擴增抑制物。
陰性樣品要與每組樣品同時做,以分析是否存在樣品與樣品之間的污染以及是否存在PCR產物的污染,陰性對照應該包括核酸以外的所有試劑。
當做陽性對照時,有兩個理由決定了應該使用最少數量的核酸。
由于必須有對照反應,對照模板的特點應該予以考慮。
6、控制(control)污染的方法。
已設計出很有力的酶學方法用來消除一種形式的污染—使用UNG,這一技術能有效地消除由PCR產物引起的污染。另一種控制污染的方法是使用紫外線(Ultraviolet rays),這種方法不能完全消除污染問題,但可以將污染降低幾個數量級。
7、后PCR區PCR完成以后,需要分析樣品并解釋數據,應該留出一個專門用于反應后處理樣品的地方。后PCR活動中使用的所用試劑、一次性耗材和儀器都必須是專門用于這一目的,決不能把實驗室這一區域的試劑或儀器用于任何前PCR活動。
    x
    手機
    電話
    微信
    QQ
    主站蜘蛛池模板: 超声波清洗机_大型超声波清洗机_工业超声波清洗设备-洁盟清洗设备 | 手持式线材张力计-套帽式风量罩-深圳市欧亚精密仪器有限公司 | 镀锌钢格栅_热镀锌格栅板_钢格栅板_热镀锌钢格板-安平县昊泽丝网制品有限公司 | 石家庄律师_石家庄刑事辩护律师_石家庄取保候审-河北万垚律师事务所 | 至顶网| 骨密度仪-骨密度测定仪-超声骨密度仪-骨龄测定仪-天津开发区圣鸿医疗器械有限公司 | 镀锌方管,无缝方管,伸缩套管,方矩管_山东重鑫致胜金属制品有限公司 | 天津试验仪器-电液伺服万能材料试验机,恒温恒湿标准养护箱,水泥恒应力压力试验机-天津鑫高伟业科技有限公司 | 螺钉式热电偶_便携式温度传感器_压簧式热电偶|无锡联泰仪表有限公司|首页 | 密集架|电动密集架|移动密集架|黑龙江档案密集架-大量现货厂家销售 | 青岛侦探调查_青岛侦探事务所_青岛调查事务所_青岛婚外情取证-青岛狄仁杰国际侦探公司 | 英思科GTD-3000EX(美国英思科气体检测仪MX4MX6)百科-北京嘉华众信科技有限公司 | 厦门网站建设_厦门网站设计_小程序开发_网站制作公司【麦格科技】 | 顺景erp系统_erp软件_erp软件系统_企业erp管理系统-广东顺景软件科技有限公司 | 河南砖机首页-全自动液压免烧砖机,小型砌块水泥砖机厂家[十年老厂] | 卓能JOINTLEAN端子连接器厂家-专业提供PCB接线端子|轨道式端子|重载连接器|欧式连接器等电气连接产品和服务 | 杰恒蠕动泵-蠕动泵专业厂家-19年专注蠕动泵 | 广域铭岛Geega(际嘉)工业互联网平台-以数字科技引领行业跃迁 | 马尔表面粗糙度仪-MAHR-T500Hommel-Mitutoyo粗糙度仪-笃挚仪器 | 滑板场地施工_极限运动场地设计_滑板公园建造_盐城天人极限运动场地建设有限公司 | 深圳市人通智能科技有限公司| 护栏打桩机-打桩机厂家-恒新重工 | 上海公司注册-代理记账-招投标审计-上海昆仑扇财税咨询有限公司 上海冠顶工业设备有限公司-隧道炉,烘箱,UV固化机,涂装设备,高温炉,工业机器人生产厂家 | 电池挤压试验机-自行车喷淋-车辆碾压试验装置-深圳德迈盛测控设备有限公司 | 专业甜品培训学校_广东糖水培训_奶茶培训_特色小吃培训_广州烘趣甜品培训机构 | 长春网站建设,五合一网站设计制作,免费优化推广-长春网站建设 | 代做标书-代写标书-专业标书文件编辑-「深圳卓越创兴公司」 | 棉柔巾代加工_洗脸巾oem_一次性毛巾_浴巾生产厂家-杭州禾壹卫品科技有限公司 | 生态板-实木生态板-生态板厂家-源木原作生态板品牌-深圳市方舟木业有限公司 | 神马影院-实时更新秒播 | 正压密封性测试仪-静态发色仪-导丝头柔软性测试仪-济南恒品机电技术有限公司 | 陕西安玻璃自动感应门-自动重叠门-磁悬浮平开门厂家【捷申达门业】 | 没斑啦-专业的祛斑美白嫩肤知识网站-去斑经验分享 | 有福网(yofus.com)洗照片冲印,毕业聚会纪念册相册制作个性DIY平台 | 亚洲工业智能制造领域专业门户网站 - 亚洲自动化与机器人网 | 昆山新莱洁净应用材料股份有限公司-卫生级蝶阀,无菌取样阀,不锈钢隔膜阀,换向阀,离心泵 | OpenI 启智 新一代人工智能开源开放平台 | 化工ERP软件_化工新材料ERP系统_化工新材料MES软件_MES系统-广东顺景软件科技有限公司 | 螺旋丝杆升降机-SWL蜗轮-滚珠丝杆升降机厂家-山东明泰传动机械有限公司 | 临朐空调移机_空调维修「空调回收」临朐二手空调 | 布袋除尘器|除尘器设备|除尘布袋|除尘设备_诺和环保设备 |